返回首页 -您现在正在浏览：>首页 -> 论文下载 -> 医药论文 -> 临床医学 >

TGFβ1、TGFβR1、Smad4在乳腺癌发生、发展中的作用及其相互关系

作者:时间:2011-02-11 11:14:57 来源:www.ksfbw.com 阅读次数:785次 ]

【摘要】　　目的：探讨TGFβ1、TGFβR1及Smad4三者在乳腺癌中的表达与其发生、发展、转移等生物学行为以及预后的关系，为乳腺癌发病和治疗机制提供理论和实验依据。方法：提取30例乳腺癌临床标本（经液氮、研磨等处理）和MCF7、T47D、SKBR3三种乳腺癌细胞（取指数增长期细胞）总RNA，反转录cDNA第一链，克隆TGFβR1、Smad4基因片段，测定质粒浓度，制备标准样品，并作出标准曲线，探针法荧光定量PCR（FQPCR）检测TGFβR1和Smad4基因mRNA表达。结果：FQPCR检测发现恶性程度高的SKBR3细胞，其TGFβR1和Smad4的基因拷贝数明显低于恶性程度低的MCF7细胞（P均＜0.01），T47细胞两种基因拷贝数介于两者之间。结论：随着乳腺癌细胞病理类型恶性程度增加，TGFβR1和Smad4 mRNA表达逐步下降，表明TGFβ1和Smad4可能具有类似乳腺癌抑癌基因的作用。

【关键词】转化生长因子β1; 转化生长因子β1受体; Smad4; 乳腺癌

　　［ABSTRACT］ Objective: To investigate the expression of TGFβ1, TGFβR1 and Amad4 proteins and the relationship to the initiation, progression, metaptosis and prognosis of breast cancer. Methods: The samples of 30 cases and 3 cell lines(MCF7,T47D,SKBR3) of breast cancer were selected, and the total mRNA was extracted. Reverse transcription, and TGFβR1 and Smad4 genes cloning were carried out. Then the concentration of plasmid was measured, standard curve was made, and the expression of TGFβR1 and Smad4 mRNAs were assayed by FQPCR machine. Results: The gene copies of TGFβR1 and Smad4 in SKBR3 cells were lower than that in MCF7 cells (P＜0.01) and the gene copies in T47 was middle. Conclusions: Our studies by FQPCR show that the lower TGFβR1 and Smad4 mRNAs expression, the worse biology characteristic of breast cancer, which indicate TGFβR1 and Smad4 act possibly as the role of antioncogene in breast cancer.

　　［KEY WORDS］ TGFβ1; TGFβR1; Smad4; Breast cancer

　　乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，全世界每年约有120万妇女患乳腺癌。目前，乳腺癌病因尚不十分清楚，发病机理非常复杂，涉及多个因素的作用。多数研究认为，乳腺癌的发生是因为原癌基因的激活和抑癌基因的功能丧失，其发展是一个多因素多阶段的过程，往往涉及多个基因的改变［1,2］。TGF β /Smads信号传导通路及其与肿瘤关系多见于胰腺癌、妇科肿瘤等［3,4］，而在乳腺癌中TGFβ1、TGFβR1及Smad4三者的表达及其相互关系如何，它们对乳腺癌发生、发展有何意义，目前还不完全清楚。本实验拟采用荧光定量PCR (fluorescent quantitation polymerase chain reaction，FQPCR)、免疫组织化学/免疫细胞化学、Western Blotting等技术，检测乳腺癌患者和乳腺癌细胞株中的TGFβ1、TGFβR1和Smad4 在mRNA水平和蛋白水平表达，进一步深入三者在乳腺癌中的表达与其发生、发展、转移等生物学行为以及预后的关系，为探讨TGFβ信号转导过程提供新的思路，同时为乳腺癌的Smad4基因导入治疗，以及尝试应用iRNA技术，提供理论和实验依据

　　1 材料与方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 标本和细胞发表医学论文

　　本组乳腺癌临床标本共30例，全部为海南医学院附属医院2005年1月～2008年12月门诊或住院患者，其中外科手术切除标本25例，病理活检标本5例。患者年龄24～60岁，中位年龄43岁；按照病理学类型分为非浸润性癌4例、早期浸润性癌6及浸润性癌20例。

　　乳腺癌细胞株MCF7、T47D、SKBR3细胞为本实验室保存。正常对照：选取非乳腺癌患者正常乳腺组织手术切除标本10例作为对照。

　　1.1.2 质粒和细菌

　　pGEMTTGFβR1 、pGEMTSmad4质粒构建按照pGEMT 载体试剂盒（公司）的说明。大肠杆菌DH5α为本实验室保存。

　　1.1.3 引物和探针

　　以Genebank中Smad4 和TGFβR1基因的mRNA序列作参考，各设计一对引物和一条探针。⑴Smad4 上游引物(P1)：5′GTCGAAAACAACGCTATTGACT3′；下游引物(P2)：5′CAGAGAATTGTCGCCGTACAT3′；荧光探针：5′TCAGGACGCGATACCTCGGTATACC3′。 ⑵TGFβR1上游引物(P1)：5′GAACGACAACGATTCAACT3′；下游引物（P2）：5′GCAACACGATCATGACTT3′；荧光探针为5′TCTACGTAATAGCATGCGCCAAAT3′。

　　探针5′端标记的荧光报告基团均为FAM，3′端标记的荧光淬灭基团均为TAMRA。引物及探针均由英俊公司合成。

　　1.1.4 主要试剂

　　RPMI1640培养基（GIBCO BRL公司）；无支原体胎牛血清（杭州四季青公司）；HEPES粉（ASBC进口分装）；PBS缓冲液（NaCl 8.0g, Na2HPO4·12H2O 3.63g, KH2PO4 0.2g, pH7.4，自配）；胰蛋白酶（Sigma公司）；EDTA（公司）；TRIzol Reagent（Invitrogen公司）；DEPC（威佳公司）；氯仿（国产）；异丙醇（国产）；RT试剂盒（Fermentas公司）；Taq 酶（Progema公司）；DNA Marker（威佳公司）；Gel Estration Kit和小量质粒抽提试剂盒（QIAGEN公司）；PCR产物纯化试剂盒（博彩生物公司）。

　　1.1.5 仪器

　　二氧化碳孵箱（Hereaus B5060EK/CO2）；倒置相差生物显微镜（Olympus公司）；紫外/可见光分光光度计（Beckman DU530）；荧光定量PCR 仪（ABI公司）；数显调速多用振荡器（江苏金坛荣华仪器制造有限公司）；台

本站论文资源均为来自网络转载，免费提供给广大作者参考，不进行任何赢利，如有版权问题，请联系管理员删除！快速论文发表网（www.ksfbw.com）本中心和国内数百家期刊杂志社有良好的合作关系，可以帮客户代发论文投稿.

投稿邮箱：ksfbw@126.com
客服Q Q：论文发表在线咨询 82702382
联系电话：15295038833