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PUMA在大鼠胰腺移植缺血再灌注损伤中的意义

作者:时间:2011-02-21 10:57:25 来源:www.ksfbw.com 阅读次数:959次 ]

【摘要】目的：探讨PUMA在移植胰腺缺血再灌注损伤(I/RI)中的早期促凋亡作用。方法：对封闭群大鼠建立大鼠腔静脉内分泌引流、肠道外分泌引流的动物模型.再灌注后第0、1、2、3、4、6、9、12 h等时点,每时点处死5只大鼠,切取移植胰腺,石蜡包埋切片,原位DNA缺口末端标记(TUNEL)法测定胰腺组织细胞凋亡, Western blot方法测定移植胰腺组织PUMA,bcl2、bax、caspase3蛋白表达。结果：再灌注术后第0、1、2、3、4、6、9、12 h,胰腺细胞凋亡数分别为(29.42±4.93)、(47.65±6.43)、(74.80±9.73)、(106.35±16.80)、(148.71±19.50)、(123.96±15.54)、(97.32±10.60)和(57.42±9.56)个/高倍视野。各时点均显著高于正常胰腺(23.48±4.26)。第4小时细胞凋亡数明显增高,12 h降低到最低值,不同组细胞凋亡数的差异有统计学意义(P<0.01);PUMA以及其下游的bax和caspase8蛋白表达在第4小时达到最高峰,12 h降低到最高值,bcl2在第4小时达到最低值,蛋白表达差异均有统计学意义(P<0.05),以后逐渐升高,12 h降低到最低值,PUMA表达与各时点的细胞凋亡数有明显的正相关(r=1.00,P<0.05)。结论：I/RI后细胞早期凋亡与PUMA活化有关,PUMA是通过调节下游bax、caspase8、bcl2基因发挥凋亡促进作用。

【关键词】胰腺移植; 缺血再灌注损伤;凋亡;PUMA蛋白;大鼠法律论文发表

　　[ABSTRACT] Objective: To study the proapoptosis effect of P53 upregulated modulator of apoptosis (PUMA) protein on ischemiareperfusion injury of rats stimulated during pancreatic transplantation.Methods: Rat models of pancreatic transplantation with venacava drainage and enteric drainage were established firstly. Then 5 animals in each group were sacrificed respectively at different time points including 0, 1, 2, 3, 4, 6, 9 and12 h after reperfusion, with pancreatic grafts being removed for apoptosic analysis by using DNA nick end labeling technique and protein expression analysis of PUMA, bcl2, bax and caspase3 by using western blot method. Results: Under high power field, the numbers of apoptosic cells in pancreatic grafts at each time point was 29.42 ±4.93, 47.65 ±6.43, 74.8 ±9.73, 106.35 ±16.8, 148.71 ±19.50, 123.96 ±15.54, 97.32 ±10.6 and 57.42 ±9.56, respectively which are all significantly higher than the number in normal pancreatic tissues (23.48 ±4.26). It indicated the numbers were obviously increased at 4h after profusion while decreased to the minimum at 12h with significant difference among each group (P<0.01). The expression of PUMA, bax and caspase3 all started to upregulated at 1h after profusion and increased to maximum at 4h, then gradually decreased to minimum at 12h. While for bcl2, the expression started to downregulated at 1h after profusion and decreased to the minimum at 4h, then gradually increased to maximum at 12h. There are significant differences among the protein expression (P<0.05). Besides, the PUMA expression is positively correlated to the number of apoptosic cells. (r=1.00, P<0.05). Conclusion: Cell apoptosis in ischemiareperfusion injury is highly correlated to the activation of PUMA. The proapoptosis effect of PUMA is generated by regulating bax, caspase8 and bcl2.法律论文发表

　　[KEY WORDS] Pancreas transplantation; Ischemiareperfusion injury; Apoptosis; PUMA protein; Wistar

　　近年来大量研究表明,细胞凋亡是器官移植缺血再灌注损伤( ischemiareperfusioninjury, I/RI)的早期事件[1]，但细胞发生凋亡的机制不明。PUMA(p53 upregulated modulator of apoptosis)是2001年发现的p53下游促凋亡基因，是bcl2家族BH3亚家族中的成员，PUMA在受到p53缺氧、放射、化疗等刺激信号下迅速被激活，从而导致PUMA下游bcl2家族基因的活性改变，引起细胞色素C的释放和Caspase酶的活化，最终导致细胞凋亡[2，3]。本研究应用大鼠胰腺、十二指肠移植模型, 探讨PUMA在大鼠胰腺、十二指肠移植I/RI中的早期凋亡促进作用。

　　1 材料与方法法律论文发表

　　1.1 实验动物

　　43只(对照组3只)清洁级封闭群SD大鼠(供体), 体质量250～300 g ,雄性;清洁级封闭群Wistar大鼠, 40只，体质量300～350 g, 雄性, 均由上海实验动物中心提供。

　　1.2 主要试剂

　　鼠抗人PUMA多克隆抗体购自Cell Signals公司，兔抗鼠bcl2 、bax、 caspase3、Actin多克隆抗体和Western bloting试剂购自Santa Cru公司,细胞凋亡检测试剂盒购南京建成生物工程研究所。

　　1.3 大鼠胰腺移植动物模型的制备法律论文发表

　　见文献[4]。

　　1.4 移植模型的分组和处理

　　移植模型共分为8组，每组5只;各组大鼠于胰腺再

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