老瓜头生物总碱对佐剂性关节炎大鼠血清中细胞因子及NO的影响

【摘要】  目的 观察老瓜头生物总碱对佐剂性关节炎大鼠血清中白细胞介素-1 (IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)和一氧化氮(NO)含量的影响。方法 采用弗氏完全佐剂(CFA)制备大鼠佐剂性关节炎(AA)模型，用放射免疫方法检测大鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10的含量;用硝酸还原法检测大鼠血清中NO的含量。结果 与正常对照组相比，模型组大鼠血清中IL-1β、TNF-α及NO含量升高，IL-4、IL-10含量降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比，老瓜头生物总碱能够降低佐剂性关节炎大鼠血清中IL-1β、TNF-α及NO含量，升高IL-4、IL-10含量。结论 老瓜头生物总碱的抗炎作用可能与下调致炎因子(IL-1β、TNF-α、NO)，上调抗炎因子(IL-4、IL-10)有关。

【关键词】  老瓜头生物总碱;佐剂性关节炎;白细胞介素-1β;肿瘤坏死因子;白细胞介素-4;白细胞介素-10

             老瓜头(Cynanchum Komarovii AI. Iljiniski)系箩摩科鹅绒藤属多年草本生植物，别名牛心朴子，广泛分布于次生沙漠中的半固定沙丘和荒漠流沙区。近年来，国内研究表明其化学成分除含有一些无机元素外，还含有生物碱、挥发油、甙类、黄酮醇类、糖类等化合物。老瓜头提取物有抗炎、抗菌、抗肿瘤、镇痛、止咳、祛痰、平喘等作用[1]。老瓜头生物总碱(Total Alkaloid of Cynanchum Komarovii AI. Iljiniski, TACKI)是从老瓜头中提取的生物总碱，具有抑制蛋清致大鼠足趾肿胀、大鼠棉球肉芽肿以及角叉菜胶诱导的大鼠气囊滑膜炎等抗炎作用[2]。本研究以大鼠佐剂性关节炎(Adjuvant Arthritis, AA)为模型，观察TACKI对大鼠佐剂性关节炎血清细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10及NO的影响。

　　1 材料与方法历史论文发表

　　1.1 实验动物 Sprague-Dawley(SD)大鼠，雄性，清洁级，体重150～200g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，合格证号为SCXK(宁)2005-0001。随机分组，常规饲养，自然昼夜。

　　1.2 实验仪器 大鼠足容积测试仪，自制; UV/9100紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司); GC1200型γ计数器(中国科技大学中佳光电仪器公司)

　　1.3 实验药品与试剂 老瓜头生物总碱(宁夏回族自治区物理研究所分析测试中心孟协中研究员提供)，雷公藤多苷片(上海医科大学红旗制药厂，批号040102，10mg/片)，弗氏完全佐剂(complete Freund’s adjuvant, CFA;美国Sigma公司，批号Lot084k8928)，TNF-α、IL-1放免试剂盒购自解放军总医院科技开发中心放免研究所;IL-4、IL-10放免试剂盒购自北京北方生物技术研究所;NO硝酸还原法检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。

　　1.4 方法

　　1.4.1 大鼠佐剂性关节炎模型(Adjuvant Arthritis, AA)制备 按照文献[3]方法，除正常对照组外，其他各组大鼠右后足常规消毒后，于足跖皮内注射CFA 0.1mL致炎。

　　1.4.2 分组及给药方法 大鼠随机分为6组，每组10只。(1)正常对照组;(2)模型对照组均给予生理盐水灌胃;(3)雷公藤多苷组将雷公藤多苷片研成细末，加生理盐水，配制成混悬液(6.0mg/kg);(4)TACKI高、中、低剂量组(20.0、10.0、5.0mg/kg)，用生理盐水配制，放置1d使其充分溶解，以上药物均以10mL/kg灌胃，每天1次，于致炎后第19天开始给药，连续8d。

　　1.5 血清中IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10及NO含量的测定 按照试剂盒说明操作。

　　1.6 统计学方法 实验结果以(±s)表示。应用SPSS 11.5软件进行统计学处理，多样本均数间比较采用One-Way ANOVA检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 TACKI对AA大鼠血清TNF-α、IL-1β含量的影响

　　CFA致炎后27d，模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量明显高于正常对照组 (P<0.01);中、高剂量组大鼠血清TNF-α、IL-1β含量均低于模型组(P<0.05或P<0.01)，与雷公藤多苷组相当(P>0.05)，且接近正常对照组水平(P>0.05)，见表1。

　　2.2 TACKI对AA大鼠血清IL-4、IL-10含量的影响

　　CFA致炎后27d，模型组大鼠血清IL-4、IL-10含量降低，高剂量组大鼠血清IL-4、IL-10含量高于模型组(P<0.05 或P<0.01)，见表1。

　　2.3 TACKI对AA大鼠血清中NO含量的影响

　　CFA致炎后27d，模型组大鼠血清中NO含量升高， TACKI中、高剂量组大鼠血清中NO含量明显低于模型组(P<0.01)，其高剂量组低于雷公藤多苷组(P<0.05)， 接近正常对照组水平(P>0.05)，见表1。表1 TACKI对AA大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-4、IL-10、NO含量的影响

　3 讨论

　　近年研究表明，细胞因子网络的失调在类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis, RA)的发病过程中占有重要地位[4]，具有促炎、抑炎或刺激、抑制的正负反馈的免疫调控作用[5]。本实验结果显示，模型组大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量升高，IL-4、IL-10含量降低，提示AA大鼠病变过程中存在细胞因子网络平衡失调，表现为致炎因子的升高和抗炎因子的减少。TACKI中、高剂量组大鼠血清中TNF-α、IL-1β含量降低， TACKI高剂量组大鼠血清中IL-4、IL-10含量升高。提示TACKI发挥其抗炎作用可能与通过下调致炎因子(TNF-α、IL-1β)、上调抗炎因子(IL-4、IL-10)，调节AA大鼠血清中细胞因子的平衡有关。

　　关节炎大鼠的多发性关节病即与NO的过量产生有关[6]， NO可以促进巨噬细胞释放IL-1、TNF-α形成恶性循环而增加RA的临床症状，因此，减少NO可以减轻关节损伤。本实验结果显示，CFA致炎后27d模型组大鼠血清中NO含量升高， TACKI中、高剂量组能够降低大鼠血清中NO含量，且其高剂量组大鼠血清中NO含量与雷公藤多苷组相当[7]，接近正常对照组水平。提示TACKI发挥抗炎作用可能与其抑制细胞NO的合成有关。历史论文发表

【参考文献】
  1] 杨卫东, 郝银举, 李红兵, 等. 老瓜头生物总碱镇痛、抗炎作用的实验研究[J]. 宁夏医学院学报, 2005, 27 (3): 191-193.

　　[2] 郑萍, 戴贵东, 杨卫东. 老瓜头生物总碱抗炎作用机制的的实验研究[J]. 宁夏医学院学报, 2006, 28 (2): 99-100.

　　[3] 徐叔云, 卞如濂，陈修.药理实验方法学[M]. 第2版. 北京：人民卫生出版社, 1991: 21.

　　[4] Feldmann M, Brennan FM, Maini RN. Role of cytokines in rheumatoid arthritis[J] .Annu Rev Immunol, 1996,14:397.

　　[5] 张义浜.类风湿性关节炎发病机制及其治疗方法研究进展[J]. 细胞与分子免疫学杂志, 2005, 21 (suppl): 88-90.

　　[6] D.O.Stichtenoth. Notric oxide and inflammatory joint diseases [J].British Journal of Rheumatology, 1998, 37: 246-257.

　　[7] 何珏,肖诚,任海霞,等.雷公藤在类风湿关节炎模型中的研究进展[J].中国中医基础医学杂志, 2006, 19 (9): 720-721.