宁夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布频率
【摘要】 目的 了解宁夏回族人群CYP2D6*10等位基因及基因型分布频率,为临床使用CYP2D6底物药物提供依据。方法 采用等位基因特异扩增（ASA-PCR）技术，分析了180例回族体检者的CYP2D6基因型。结果 CYP2D6*10基因点突变结果中野生型纯合子频率为32.3%，杂合子频率为38.3%，突变型纯合子频率为29.4%，突变型等位基因频率为48.6%。结论 宁夏回族人群CYP2D6*10突变基因频率与国内外其他民族有一定差异，在临床应用经CYP2D6代谢的药物时应考虑个体间的代谢速率差异，确保用药安全有效。
【关键词】 CYP2D6*10；基因；多态性；回族哲学论文发表
Abstract: Objective To investigate the allele and genotype frequences of CYP2D6*10 in Ningxia Hui population. Methods 180 Ningxia Hui blood samples were collected. The ASAPCR was performed and the PCR products were genotyped.Results The mutant allele frequences were 48.6%. Conclusion CYP2D6*10 allele frequences between Ningxia hui ethnicity and other populations was significantly different.
Key words：CYP2D6*10 ；gene；polymorphism；Hui ethnicity
细胞色素P450 2D6 (CYP2D6) 又称硫酸异喹胍羟化酶, 是近年来被广泛研究的一种肝微粒体药物氧化代谢多态性酶，该酶参与临床常用的30多种药物羟化反应,例如抗精神抑郁药、抗心律失常药、β2阻滞剂等［1-3］。由于CYP2D6 至少有50多处突变和73 种等位基因，因此酶的活性具有高度多态性［4-5 ］ 。CYP2D6基因有明显的种族差异。我们于2007年1～7月间以宁夏回族人群为研究对象，采用等位基因特异扩增法（ASA-PCR)，对东方人群中最常见的基因突变型第10外显子（CYP2D6*10）进行研究，以期为患者使用CYP2D6底物药物提供依据。
1 材料和方法
1.1 材料
全血总DNA提取试剂盒、DNA Tag酶ET-500、DNA Marker B均购自北京赛百盛生物公司；引物由大连宝生物工程有限公司合成，引物序列见表1。表1 引物序列（略）
1.2 方法
1.2.1 DNA样品制备
利用2007年1～7月间收集的宁夏回族自治区人民医院体检的180 例回族受试者的外周血，采用北京赛百盛生物公司的硅胶膜基因组提取试剂盒提取基因组DNA，定量后稀释成100ng/μL, 储存于-20℃备用。
1.2.2 PCR扩增及产物的鉴定
用表1所述的3对引物（P1、P2)、（P1、P3)、（P1、P4)在PCR的反应条件下（表2）分别扩增出CYP2D6全长基因片段及包括第10外显子多态位点的DNA片段。PCR反应体系为50μL，含有0．2 mmol/L dNTP、1．0 mol/L引物、1．25 mmol/L MgCl2、0．5 U Taq DNA聚合酶、10×PCR反应缓冲液。表2 PCR反应条件（略）
1.2.3 电泳及结果的统计分析
取PCR扩增产物用1％ 琼脂糖凝胶进行电泳，在BioRad的Quantity One 凝胶成像分析系统仪上进行观察和分析。确定CYP2D6*10基因型，进行基因频率的计算分析。
2 结果
2.1 DNA提取质量
经紫外分光光度计检测，180名受试者外周血白细胞中提得的DNA A260/A280均在1.8～2.0之间，纯度均符合要求。
2.2 PCR及电泳结果
见图1。用引物P1、P2扩增得到790bp全长CYP2D6基因，以P1、P3为引物可扩增出137bp CYP2D6*10野生型纯合子（wt)，以P1、P4为引物可扩增出137bp CYP2D6*10突变型纯合子(mt)，若以P1、P3和P1、P4为引物均可扩增出137bp CYP2D6*10片段表示CYP2D6*10为杂合子(Wt/mt)。
2.3 基因型及基因频率 哲学论文发表
见表3，由表中数据可计算出180例受试者中CYP2D6突变等位基因频率为48.6%。表3 180例受试者等位基因与基因型频率（略）
3 讨论
药物代谢的主要场所是肝脏,肝脏进行生物转化依赖于微粒体中的多种酶系,其中最重要的是细胞色素P450 混合功能氧化酶系统。细胞色素氧化酶P450 (CYP450) 是一类参与内源性和外源性化合物代谢的酶,这类酶有许多同工酶,根据氨基酸序列符合程度,P450 分为多个基因P亚基因家族,同一家族的酶具有相似的功能。目前已知在人体内有35 种P450 基因,主要有CYP123 三个家族酶系参与体内外源性物质的转化,重要的有7 种,CYP2D6 即为其中的1 种。CYP2D6位于第22号染色体长臂上，与相关基因CYP2D7和一假基因CYP2D8P共同组成CYP2D基因群。现已发现CYP2D6 对药物的代谢呈现出明显的个体差异和种族差异及地域差异［6-7］。目前已报道多种CYP450 酶活性受基因多态性的控制, 包括CYP2C9、CYP2C19 、CYP3A4和CYP2 E1等 ,有关CYP2A6基因多态性及其与表型关系的研究也有陆续报道。Heim［8］等首先报道了CYP2D6 等位基因，CYP2D6 基因缺陷导致CYP2D6弱代谢性。随后，新的等位基因不断被发现。经研究发现中国人多携带有CYP2D6*10突变性等位基因，其外显子1第188为碱基C为T取代，造成表达的CYP2D6酶第34位脯氨酸变为丝氨酸，导致酶活性的下降。
本研究采用ASA-PCR法第一步扩增出790bpCYP2D6基因片段，第二步扩增中引物P3、P4的3'端为G的与野生型等位基因配对，3'端为A与突变性等位基因配对，通过扩增得到野生型和突变型基因片段。由于Taq 酶缺乏3′→5′外切酶活性,当3′形成错配时,磷酸酯键难于形成,导致扩增终止。反之,引物3′端与模板配对成功,则通过扩增,得到野生型及突变型等位基因的特异片段。
本研究发现CYP2D6*10突变基因频率为48.6%，比中国汉族人（58.4%)、韩国人（51%）较低；比中国苗族人（47.5%）、日本人（38.6%）、欧洲白种人（1.5%）较高［9］。由于突变基因导致酶活性降低，减弱了对药物的代谢作用，在服用同一剂量药物时更易发生药物毒副作用。因此，测定中国各民族CYP2D6基因型，有利于降低CYP2D6底物药发生不良反应的风险，对于指导临床个体化合理用药具有重要指导作用。
【参考文献】
［1］Merce Garcia-Barcelo,Lok Yee Chow,Helen Fung Kum Chiu.Genetic Analysis of the CYP2D6 Locus in a Hong Kong Chinese Population［J］. Clin Chem,2004, 46(1)：18-23.
［2］Maria C,Ledesmal,Jose A.G,Agundez.Identification of subtypes of CYP2D Gene Rearrangements among Carriers of CYP2D6 gene Deletion and Duplication［J］.Clin Chem,2005,51(6):939-943.
［3］Ingelman-Sundberg M. Pharmacogenetics of cytochrome P450 and its application in drug therapy: the past, present, and future ［J］. Trends Pharmacol Sci，2004, 25: 193-200.
［4］Ingelman-Sundberg M. Genetic polymorphisms of cytochrome P4502D6 (CYP2D6): clinical consequences, evolutionary aspects, and functional diversity［J］. Pharmacogenom J,2005,5:6-13.
［5］Heim MH,Meyer UA.Evolution of a highly polymorphic human cytochrome P450 gene cluster:CYP2D6 ［J］.Genomics,1992,14:49-58.
［6］CYP2D6 allele nomenclature. http://www.imm.ki.se/CYPalleles/cyp2d6.htm (accessed March 10, 2005).
［7］Bradford LD.CYP2D6 allele frequencyin European Caucasians, Asians, Africans, and their descendants［J］.Pharmacogenom J,2002,3:229-243.
［8］Heim M,Meyer UA.Gentyping of poor metabolizers of debrsoquine by allele-specific PCR amplification［J］. Lancet,1990,336:529-532.
［9］雷霆雯，许庆忠，吴青青，等.中国苗族 CYP2D6*10基因多态性的研究［J］.中国公共卫生，2004,20（4）:439-440.哲学论文发表
本站论文资源均为来自网络转载，免费提供给广大作者参考，不进行任何赢利，如有版权问题，请联系管理员删除！ 快速论文发表网（www.ksfbw.com）本中心和国内数百家期刊杂志社有良好的合作关系，可以帮客户代发论文投稿.
投稿邮箱：ksfbw@126.com
客服Q Q：
82702382
联系电话：15295038833
本站论文资源均为来自网络转载，免费提供给广大作者参考，不进行任何赢利，如有版权问题，请联系管理员删除！
文章评论
共有 0 位网友发表了评论