水产品中丙酸睾酮残留检测方法分析
作者:黄成泽 蒋翠红时间:2015-12-29 14:35:12 来源:www.ksfbw.com 阅读次数:1017次 ]
【内容摘要】：丙酸睾酮是一种比较典型的睾酮类的衍生物，其主要合成方式是人工合成，根据其合成的主要物质以及其主要的特性特点可以看出，丙酸睾酮是一种具有蛋白质活性的同化激素，对于当前的水产养殖业的发展具有重要的作用。因此在这种情况下，对于水产品中丙酸睾酮残留检测方法进行研究和分析具有重要的现实意义。
【关键词】: 水产品 丙酸睾酮 残留检测 方法分析
1 水产品中丙酸睾酮残留的气相色谱- 质谱测定方法分析
1.1 实验材料
本次试验采用的实验材料主要包括三大类，分别是实验试剂、实验溶液和实验样品，以下将作简要分析。
本次试验采用的主要试验试剂如下：纯度≥ 97% 的丙酸睾酮；纯度≥ 97% 的诺龙-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。
本次试验采用的主要食盐溶液有100μg/mL 的丙酸睾酮标准贮备溶液、诺龙-D3 内标贮备液和衍生化试剂、饱和氯化钠溶液等等。
本次试验的主要实验样品为褐牙鲆、凡纳滨对虾、小黄鱼等水产品。
1.2 实验方法分析
1. 样品处理
取待测样品均匀捣碎处理，于冷冻室存储。先称取5.00g 样品于50ml 离心管中，加入工作溶液进行混匀，水浴十分钟之后， 再冷却至室温，加入一定量的叔丁基甲醚，振荡均匀，进行超声处理，再进行离心处理，取上清液。
2. 净化处理
取上清液于-80℃条件下静置约20 分钟，然后转移至鸡心瓶进行蒸发处理。再在残留物中添加乙酸乙酯- 正己烷进行溶解，溶解完毕后再向其中分别加入丙酮和正丁烷3ml、6ml， 倒入固相萃取柱中，准备过柱。采用丙酮- 正己烷作为过柱液， 将洗脱液进行水洗两次后，吹干。
3. 衍生化处理
取相应的衍生化试剂加入净化处理后的残渣中，混匀后进行超声处理，然后烘干，加入正己烷进行定容之后，进行气相色谱- 质谱分析。紧接着就是对于标准溶液进行衍生化处理。
4. 标准曲线的绘制
在保证一定精确性的前提下，取一定量的标准中间液丙酸睾酮与容量瓶中，然后再用甲醇溶液进行稀释，将标准中间液的浓度分别稀释成0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0μg/ mL，分别去定量按照衍生化处理的处理方法，进行GC 以及MS 测定。然后以配置的标准溶液的浓度为横坐标，以丙酸睾酮与内标衍生物的定量离子峰面积比值的平均值为纵坐标，绘制出相应的标准曲线，并根据标准曲线计算出相应的回归方程和相关的曲线系数。
5. 计算回收率、精密度以及确定最低检测限
1.3 结果与讨论
本次实验测定共经历了样品处理、净化处理、衍生化处理、标准曲线绘制和结果出来分析等几个主要阶段。过程中采用配置的标准溶液的浓度为横坐标，以丙酸睾酮与内标衍生物的定量离子峰面积比值的平均值为纵坐标，绘制出相应的标准曲线具有一定的科学性。所选择的回收率、精密度的计算方法也具有很好的说服力和可信度，从实验的结果来看，水产品中丙酸睾酮残留的气相色谱- 质谱测定方法基本可以满足实际水产品的检测以及监控的基本要求，又有很好的可行性。
2 水产品中丙酸睾酮残留的液相色谱- 串联质谱测定方法分析
2.1 实验材料
本次试验采用的实验材料主要包括三大类，分别是实验试剂、实验溶液和实验样品，以下将作简要分析。
本次试验采用的主要试验试剂如下：纯度≥ 97% 的丙酸睾酮；纯度≥ 97% 的诺龙-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。本次试验采用的主要食盐溶液有100μg/mL 的丙酸睾酮标准贮备溶液、诺龙-D3 内标贮备液和衍生化试剂、饱和氯化钠溶液等等。本次试验的主要实验样品为褐牙鲆、凡纳滨对虾、小黄鱼等水产品。
2.2 实验方法分析
1. 样品前处理
将实验所选择的样品中的鱼类的肌肉组织进行捣碎后均匀搅拌，在低温条件下储藏。先称取5.00g 样品于50ml 离心管中，再加入一定量的标准工作溶液和叔丁基甲醚之后，进行混匀、超声处理、振荡处理、离心处理，然后取上层清液分别转移到梨形瓶之中，蒸发吹干。然后进行复溶、冷冻、再离心，离心处理之后准备进行液相色谱- 串联质谱测定分析。
2. 标准曲线的绘制
在保证一定精确性的前提下，取一定量的标准中间液丙酸睾酮与容量瓶中，然后再用乙腈-0.1% 甲酸水溶液进行稀释， 将标准中间液的浓度分别稀释成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100ng/ml，另外在每一个标准溶液中还要加入一定量的20 ng/mLNT-D3 作为内标的在一定条件下进行液相色谱- 串联质谱测定。然后以标准中间液的浓度作为横坐标，以丙酸睾酮与内标衍生物的定量离子峰面积比值的平均值为纵坐标， 绘制标准曲线，并根据标准曲线计算出相应的回归方程和相关的曲线系数。
3. 计算回收率、精密度以及确定最低检测限
4. 丙酸睾酮的飞行时间质谱定性测定
采用1.0 μg/mL 丙酸睾酮标准溶液对LC-MS QTOF 进行碰撞能量、锥孔电压、等质谱条件和流动相组成及梯度等色谱条件进行研究，并确定丙酸睾酮的飞行时间质谱测定信息。
2.3 结果与讨论
本次试验检测过程中，在HPLC/MS QTOF 色谱质谱检测的基础上进行了优化处理，然后通过丙酸睾酮的飞行时间对于检测条件进行确定。最后采用内标法进行标准溶液的测定，并绘制出了相应的标准曲线。水产品中丙酸睾酮残留的液相色谱- 串联质谱测定方法的主要优点就是灵敏度高、准确性好，能够满足实际水产品的检测以及监控的基本要求，具有很好的应用价值和实用性。
3 两种检测方法的比较分析
从这两种检测方法的检测结果来看，都可以满足实际水产品的检测以及监控的基本要求，因此都可以应用在水产品中丙酸睾酮残留检测过程中。但是水产品中丙酸睾酮残留的气相色谱- 质谱测定方法的前者准备工作比较复杂，而且实验步骤较多，因此和液相色谱- 串联质谱测定方法相比，具有浪费时间、难度大的缺点。但在实际的应用过程中，两种检测方法各有利弊，具体的方法的采用还应该根据实际的费用投入和检测要求而进行确定，并在检测过程中进行不断地优化和改善。
4 结语
在一定条件下，水产品中丙酸睾酮可以很好的提高水产品饲养过程中的饲料的转化率，促进水中动植物的生长，进而提高水产养殖的产量，提高经济效益。但是如果水产品中的丙酸睾酮超过一定含量，那么就会对人体造成一定伤害，影响食品安全， 所以对于丙酸睾酮残留的检测方法还应该引起足够的重视。
【参考文献】：
[1] 田良良, 曹立民, 王建华, 徐杰, 林洪. 水产品中丙酸睾酮激素的同位素稀释气相色谱- 质谱法分析[J]. 中国渔业质量与标准. 2011(03) .
【关键词】: 水产品 丙酸睾酮 残留检测 方法分析
1 水产品中丙酸睾酮残留的气相色谱- 质谱测定方法分析
1.1 实验材料
本次试验采用的实验材料主要包括三大类，分别是实验试剂、实验溶液和实验样品，以下将作简要分析。
本次试验采用的主要试验试剂如下：纯度≥ 97% 的丙酸睾酮；纯度≥ 97% 的诺龙-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。
本次试验采用的主要食盐溶液有100μg/mL 的丙酸睾酮标准贮备溶液、诺龙-D3 内标贮备液和衍生化试剂、饱和氯化钠溶液等等。
本次试验的主要实验样品为褐牙鲆、凡纳滨对虾、小黄鱼等水产品。
1.2 实验方法分析
1. 样品处理
取待测样品均匀捣碎处理，于冷冻室存储。先称取5.00g 样品于50ml 离心管中，加入工作溶液进行混匀，水浴十分钟之后， 再冷却至室温，加入一定量的叔丁基甲醚，振荡均匀，进行超声处理，再进行离心处理，取上清液。
2. 净化处理
取上清液于-80℃条件下静置约20 分钟，然后转移至鸡心瓶进行蒸发处理。再在残留物中添加乙酸乙酯- 正己烷进行溶解，溶解完毕后再向其中分别加入丙酮和正丁烷3ml、6ml， 倒入固相萃取柱中，准备过柱。采用丙酮- 正己烷作为过柱液， 将洗脱液进行水洗两次后，吹干。
3. 衍生化处理
取相应的衍生化试剂加入净化处理后的残渣中，混匀后进行超声处理，然后烘干，加入正己烷进行定容之后，进行气相色谱- 质谱分析。紧接着就是对于标准溶液进行衍生化处理。
4. 标准曲线的绘制
在保证一定精确性的前提下，取一定量的标准中间液丙酸睾酮与容量瓶中，然后再用甲醇溶液进行稀释，将标准中间液的浓度分别稀释成0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.5、1.0μg/ mL，分别去定量按照衍生化处理的处理方法，进行GC 以及MS 测定。然后以配置的标准溶液的浓度为横坐标，以丙酸睾酮与内标衍生物的定量离子峰面积比值的平均值为纵坐标，绘制出相应的标准曲线，并根据标准曲线计算出相应的回归方程和相关的曲线系数。
5. 计算回收率、精密度以及确定最低检测限
1.3 结果与讨论
本次实验测定共经历了样品处理、净化处理、衍生化处理、标准曲线绘制和结果出来分析等几个主要阶段。过程中采用配置的标准溶液的浓度为横坐标，以丙酸睾酮与内标衍生物的定量离子峰面积比值的平均值为纵坐标，绘制出相应的标准曲线具有一定的科学性。所选择的回收率、精密度的计算方法也具有很好的说服力和可信度，从实验的结果来看，水产品中丙酸睾酮残留的气相色谱- 质谱测定方法基本可以满足实际水产品的检测以及监控的基本要求，又有很好的可行性。
2 水产品中丙酸睾酮残留的液相色谱- 串联质谱测定方法分析
2.1 实验材料
本次试验采用的实验材料主要包括三大类，分别是实验试剂、实验溶液和实验样品，以下将作简要分析。
本次试验采用的主要试验试剂如下：纯度≥ 97% 的丙酸睾酮；纯度≥ 97% 的诺龙-D3 ；DTE ；TMIS ；HFBA ；丙酮； 叔丁基甲醚；正己烷；乙酸乙酯；甲醇；乙醚等等。本次试验采用的主要食盐溶液有100μg/mL 的丙酸睾酮标准贮备溶液、诺龙-D3 内标贮备液和衍生化试剂、饱和氯化钠溶液等等。本次试验的主要实验样品为褐牙鲆、凡纳滨对虾、小黄鱼等水产品。
2.2 实验方法分析
1. 样品前处理
将实验所选择的样品中的鱼类的肌肉组织进行捣碎后均匀搅拌，在低温条件下储藏。先称取5.00g 样品于50ml 离心管中，再加入一定量的标准工作溶液和叔丁基甲醚之后，进行混匀、超声处理、振荡处理、离心处理，然后取上层清液分别转移到梨形瓶之中，蒸发吹干。然后进行复溶、冷冻、再离心，离心处理之后准备进行液相色谱- 串联质谱测定分析。
2. 标准曲线的绘制
在保证一定精确性的前提下，取一定量的标准中间液丙酸睾酮与容量瓶中，然后再用乙腈-0.1% 甲酸水溶液进行稀释， 将标准中间液的浓度分别稀释成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100ng/ml，另外在每一个标准溶液中还要加入一定量的20 ng/mLNT-D3 作为内标的在一定条件下进行液相色谱- 串联质谱测定。然后以标准中间液的浓度作为横坐标，以丙酸睾酮与内标衍生物的定量离子峰面积比值的平均值为纵坐标， 绘制标准曲线，并根据标准曲线计算出相应的回归方程和相关的曲线系数。
3. 计算回收率、精密度以及确定最低检测限
4. 丙酸睾酮的飞行时间质谱定性测定
采用1.0 μg/mL 丙酸睾酮标准溶液对LC-MS QTOF 进行碰撞能量、锥孔电压、等质谱条件和流动相组成及梯度等色谱条件进行研究，并确定丙酸睾酮的飞行时间质谱测定信息。
2.3 结果与讨论
本次试验检测过程中，在HPLC/MS QTOF 色谱质谱检测的基础上进行了优化处理，然后通过丙酸睾酮的飞行时间对于检测条件进行确定。最后采用内标法进行标准溶液的测定，并绘制出了相应的标准曲线。水产品中丙酸睾酮残留的液相色谱- 串联质谱测定方法的主要优点就是灵敏度高、准确性好，能够满足实际水产品的检测以及监控的基本要求，具有很好的应用价值和实用性。
3 两种检测方法的比较分析
从这两种检测方法的检测结果来看，都可以满足实际水产品的检测以及监控的基本要求，因此都可以应用在水产品中丙酸睾酮残留检测过程中。但是水产品中丙酸睾酮残留的气相色谱- 质谱测定方法的前者准备工作比较复杂，而且实验步骤较多，因此和液相色谱- 串联质谱测定方法相比，具有浪费时间、难度大的缺点。但在实际的应用过程中，两种检测方法各有利弊，具体的方法的采用还应该根据实际的费用投入和检测要求而进行确定，并在检测过程中进行不断地优化和改善。
4 结语
在一定条件下，水产品中丙酸睾酮可以很好的提高水产品饲养过程中的饲料的转化率，促进水中动植物的生长，进而提高水产养殖的产量，提高经济效益。但是如果水产品中的丙酸睾酮超过一定含量，那么就会对人体造成一定伤害，影响食品安全， 所以对于丙酸睾酮残留的检测方法还应该引起足够的重视。
【参考文献】：
[1] 田良良, 曹立民, 王建华, 徐杰, 林洪. 水产品中丙酸睾酮激素的同位素稀释气相色谱- 质谱法分析[J]. 中国渔业质量与标准. 2011(03) .
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