银屑病患者基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶-9的检测价值

【摘要】  目的：探讨银屑病患者血清和皮肤中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的临床意义。　方法：寻常型银屑病患者22例，健康对照组15例。采用ELISA 法检测两组血清MMP-2、MMP-9，皮肤MMP-2、MMP-9表达，采用免疫组化ABC法。结果：银屑病患者血清 、皮肤中MMP-2、TIMP-9表达水平显著高于健康对照组(P<0.05)。　结论： MMP-2、MMP-9增高可能是银屑病的发病机制之一。

【关键词】  寻常型银屑病 基质金属蛋白酶-2 基质金属蛋白酶-9

　AbstractObjective:To explore the role of matrix metalloproteinases(MMP) in the mechanism of psoriasis.Methods:MMP-2 and MMP-9 in the sera and skin lesions from 22 patients with psoriasis vulgaris were detected by ELISA and ABC methods,respectively.Other 15 healthy subjects served as controls.Results:Both serum and tissue MMP-2 and MMP-9 were increased in psoriasis patients as compared with those in controls (P<0.05).Conclusion:Elevated MMP-2 and MMP-9 may involve in the pathological progress of psoriasis.

　　Key wordspsoriasis vulgarismatrix metalloproteinase-2matrix metalloproteinase-9

　　银屑病是临床上常见、易复发、慢性红斑鳞屑性皮肤病，确切病因尚不清楚，目前认为与遗传、感染、内分泌代谢、免疫、社会精神因素等有关。主要病理改变为表皮角质形成细胞过度增殖、分化异常、真皮乳头毛细血管增生扩张和炎症细胞浸润。基 质 金 属 蛋 白 酶 (matrix metalloproteinases ，MMP)是一组金属离子依赖的细胞外基质(ECM)降解酶,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)是基质金属蛋白酶家族的重要成员，参与ECM的重塑、炎症反应、免疫应答等多种生理和病理过程。为探讨MMP 在银屑病发病机制中的作用，我们对银屑病患者皮损区和血清MMP-2、MMP-9的水平进行检测。

　　1临床资料机械论文发表

　　寻常型银屑病患者22例，男9例，女13例，年龄23～59岁，平均45岁;病程10个月～12年，平均11年;进行期16例，退行期6例;皮损范围25%～60%;均为本院皮肤科门诊或住院患者。健康对照组15例，男7例，女8例，年龄21～50岁，平均43岁。皮肤组织取自皮肤外科美容切除术者的正常皮肤。

　　2方法

　　2.1组织MMP-2、MMP-9检测皮肤标本用4mm环钻常规取材，石蜡包埋;石蜡5μm厚连续切片，常规处理后，微波炉抗原修复，依次加入稀释的一抗(兔抗人MMP-2、兔抗人MMP-9工作浓度均为1∶100)、生物素标记二抗、SABC、DAB显色、苏木素复染。具体操作步骤严格按试剂合说明进行。用已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作空白对照。兔抗人MMP-2、兔抗人MMP-9和即用型SABC免疫组化染色试剂盒均购自武汉博士德生物工程公司。

　　2.2血清MMP-2、MMP-9检测抽静脉组3ml，分离血清，-30℃保留样本备测。MMP-2、MMP-9酶联免疫吸附试剂盒购自美国 R&DSYSTEMS公司产品，购自福州迈新生物技术公司。实验操作严格按说明书进行，收集血清，加RDI-34的稀释液于96孔板中，加样，孵育2h，缓冲液清洗，加MMP-2或MMP-9结合物，加底物，加终止液;检测结果用酶标仪测定。

　　2.3统计学方法计数资料采用Ridit分析，计量资料采用t检验。

　　3结果

　　3.1判断标准皮肤标本以胞质内出现黄色颗粒状物质为阳性，按着色强弱分级计分：无着色为0，浅黄色为1，深黄色为2，棕黄色为3;着色范围以在×40倍镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计数阳性细胞所占的百分比均值：<25%为1，25%～50%为2，>50%为3。上述两项相加即为MMP-2或TIMP-2表达强度积分：<2分为阴性，～3分为弱阳性(+)，～4分为阳性(++)，>4分为强阳性(+++)。

3.2两组皮肤MMP-2、MMP-9表达

　　银屑病组皮损皮肤MMP-2、MMP-9呈强表达状态，主要位于基底层细胞胞浆;同时进行期表达强度高于退行期(P<0.05)。对照组皮肤中MMP-2、 MMP-9表达为阴性或弱阳性，见表1。表1两组皮肤MMP-2、MMP-9表达强度比较

　　3.3两组血清MMP-2、MMP-9水平比较

　　银屑病组血清 MMP-2、MMP-9水平显著高于对照组(P<0.01)。银屑病进行期与退行期血清MMP-2、MMP-9水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。表2两组MMP-2、MMP-9水平比较

　　4讨论高级会计师论文发表

　　ECM为皮肤角质形成细胞(keratinoyte,KC)的微环境，影响着KC的生长、分化。ECM的降解主要依靠蛋白水解酶类，MMPs是四类蛋白水解酶(丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天门冬氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶)中较为重要一类。MMPs是一类结构中含有Zn2+和Ca2+的蛋白水解酶类，能降解胶原、弹性蛋白、氨基葡聚糖等多种细胞外基质，成为许多领域的研究热点。Fleisehmajer[1]用免疫组化法检测发现，正常人皮肤中MMP-2表达为阴性，银屑病患者皮肤真皮层亦无MMP-2表达，但皮损表皮中MMP-2表达强烈，研究认为，银屑病表皮中细胞与细胞之间、细胞与基质间黏附关系的改变与MMP-2异常增多有关。PCR检测银屑病患者皮损也证实编码MMPs基因的存在[2]。

　　本研究显示，银屑病患者皮损中MMP-2、MMP-9呈强表达状态，主要位于基底层，进行期表达强度明显高于退行期(P<0.05)。健康对照组皮肤中MMP-2、 MMP-9表达为阴性或弱阳性，与杨志波等[3，4]报道一致。患者血清 MMP-2、MMP-9水平显著高于健康对照组(P<0.01)，但进行期与退行期患者血清MMP-2、MMP-9水平比较无统计学意义(P>0.05)。笔者认为，银屑病患者皮损中MMP强表达，势必导致皮肤ECM的降解，从而改变KC的微环境，使其正常的生长、分化受到干扰，导致表皮动力学的改变，诱发银屑病皮损的形成。银屑病患者血清中MMP-2、MMP-9升高的原因尚未完全清楚，推测皮损中MMP-2、MMP-9是其来源之一。临床上以MMP作为靶点治疗银屑病已取得一定的疗效[5]。同时有研究发现，MMP在角质形成细胞异常凋亡[6]和银屑病患者皮损微血管异常增生中起重要的作用[7]。因此，以MMP为切入点进行研究，可能为银屑病发病机制和治疗提供新的途径和方法。

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