浅析水产品中多种喹诺酮类药物残留量检测方法
作者:蒋翠红 黄成泽时间:2016-01-13 14:17:56 来源:www.ksfbw.com 阅读次数:980次 ]
【内容摘要】：随着社会的不断发展，人们生活水平的不断提升，食品安全问题愈来愈受到人们的注重，因此采取了很多方法来保障食品安全。渔药残留问题已经成为了很多国家迫切需要处理的问题，同时这也关乎着普通民众的食品安全健康。本文从渔用兽药残留的来源和危害程度入手，分析具体的残留量检测方法和手段。
【关键词】: 水产品 喹诺酮药物残留 检测方法
0 引言
喹诺酮类药物，是目前发展非常快速，进行人工合成的人畜共同使用的抗生素类药物，因为其拥有广谱，有效等其他方面的优势，不但能够对人们的不同感染症进行诊治，而且目前普遍使用在畜禽诊治，以及水产品养殖业等方面。但是这种药物，一旦进入动物体内，就可以快速的把血液扩散到组织中，使得动物组织中出现非常高浓度的药物残留。本文通过具体的分析，介绍一些喹诺酮药物残留检测方法。
1 渔用兽药残留的来源与危害
因为我国的国土面积辽阔，水产资源非常丰富，近些年来在国家政策的积极支持下，水产品养殖业得到迅猛发展，因此必须对原料来源的管理进行更深层次的强化和提升。不管是进行纯自然捕捞还是进行人工养殖，或多或少的都会遭遇到农药残留，以及其他方面的情况，具体来看，涵盖以下内容：首先，纯自然捕捞水产品，这尽管没有出现渔药投放的情况，但是环境的污染在隐形之中给水产品带来一定的程度的污染；其次在水产品养殖过程中，如果没有根据药品说明书中的规定进行严格的操作，依靠自身的经验来操作，由于渔民自身能力的不足，匮乏对水产养殖，以及药物使用方面等方面的掌握，出现乱用药， 乱投药以及其他不科学的行为，进而使得药物在水产品体内残留超出正常水平。即使渔药的使用能够在一定程度上避免水产品病害的扩延，在一定程度上防止经济损失的过大。然而这些原因的结果就是，大剂量的药物在水产品体内进行残留，如果人们进行长期的食用，在人们的体内就会急剧毒素，进而让人们的免疫系统等方面出现问题，打破了人体正常的肠道菌群环境，严重的话，还会直接威胁人们的生命安全。
2 高效液相色谱法法检测水产品中多种喹诺酮类药物残留量
2.1 高效液相色谱法的检测原理
高效液相色谱法主要用液体作为流动相，按照吸附，分配， 以及筛析不同原理进行样品分离，其固定相种类非常繁多。在高压作用下，流动相和样品在色谱柱中被频繁的进行分配，
不同的组别被隔离，最终通过检测器测出含量，具体的流程图如图1 所示。
2.2 检测试验
2.2.1 设备与试剂
其中设备主要有：高效液相色谱仪：Waters2478 高效液相色谱仪，具有双泵，美国 Waters 公司。 均质机：A-88 型组织捣碎机，北京平利洋医疗设备有限公司。 离心机：TDL80-2B 型低速台式离心机，安徽松阳医疗设备有限公司。 LD4-8 型台式离心机，郑州医用离心机厂。 TGL-16G 型高速台式离心机，长沙慈恩医疗设备有限公司。 旋转蒸发器：北京天坛科学仪器厂。循环水式多用真空泵：安徽旋洋贸易股份有限公司。振荡器：XH-C 型旋涡混合器，江西省金坛市医疗机器厂。电子天平：感量0.0001g 和 0.01g 各一台，北京安阳有限公司。 pH 计： 北京安阳有限公司。磁力加热搅拌器：上海理达仪器厂。 去离子水制取装置：Milly-Q Academic，上海百维生物科技有限公司。 固相萃取装置：美国奥泰科技有限公司。
其中试剂主要有：恩诺沙星，诺氟沙星，氟甲喹标准品：纯度大于99.0%，英国Dr.Ehrenstofer 公司；乙腈、甲醇都是色谱纯，美国 Tedia 公司；盐酸，氢氧化钠等都为分析纯，安徽安庆市溪坊化工厂。
2.2.2 溶液配制
按照具体检测的药物特点，一般情况下，标准溶液的配制方法基本如下：科学的称量诺氟沙星，氧氟沙星标准品10.0 mg，汲取0.1 mol/L HCl 溶液 10 mL，接着将乙腈放置在100 mL 容量瓶中，配成浓度为100μg/mL 的标准溶液；科学的称量恩诺沙星，环丙沙星标准品10.0 mg，用甲醇放置在100 mL 棕色容量瓶中，溶液浓度为100μg/mL ；科学的称量噁喹酸，氟甲喹标准品10.0 mg，使用0.1 mol/L NaOH 溶液10 mL 进行溶解，然后再用乙腈放置在100 mL 棕色容量瓶中，溶液浓度为 100 μg/ mL。一般将配置的溶液放置在4 ℃冰箱中进行储存，保存期不超过3 个月。
2.2.3 色谱条件
色谱柱：Zorbax Elipse XDB-C18柱，150 mm×4.6 mm（i.d.）； 流动相：A ：0.01 mol/L
四丁基溴化铵（pH 3.0）+ 乙腈=94 ＋ 6（V/V），B ：乙腈； 梯度洗脱程序具体见表1，平衡时
间5min ；流速：0.9 mL/min ；检测波长：程序具体见表2 ； 柱温：35℃ ；进样量：20 μL。
2.2.4 样品制备，提取与净化
在整个检测过程中，首先将样品进行制备：鱼类样品去除骨头和皮，选取肌肉部分；甲壳类选取能够食用的部分，将其切成小块，充分匀浆，放置在-18℃下进行冷冻储存。
其次是样品的提取和净化：称量相同样品大约5 g，将其放置在50 mL 塑料离心管，汲取20 mL 酸化乙腈，然后接着加入10 g 无水硫酸钠，使用涡旋振荡器在2500 r/min 高速振荡0.9 min-1.5 min 后，2500 r/ min 离心5min，选取上清液转移到分液漏斗，剩余的杂物使用20 mL 酸化乙腈进行再次提取2 次，合并上清液放在分液漏斗中。然后向分液漏斗中加入60 mL 正己烷溶液，同时进行充分振摇，静置分层。下层转移至梨形瓶中， 40℃水浴减压蒸发到干。把C18 固相萃取柱分别使用3 mL 甲醇，3 mL 水等预淋洗活化。使用4 mL 的磷酸盐缓冲液溶解梨形瓶中的杂物，转向提取液到柱上，过柱。流速控制在每秒一滴。重复两次，分别过柱。在过柱之后，使用3 mL 水进行冲洗； 然后再使用5 mL 洗脱液进行洗脱。搜集完洗脱液，在50℃下使用N2 进行吹干，使用1 mL 流动相定容，在经过0.22 μm 微孔滤膜后，将滤液进行检测。
2.3 结果
经过上述实验的表明，在液相色谱分析条件的确定上，样品前处理方法的确定上，以及方法回收率和精密度上，以及方法的实际应用上，都完全符合制定残留分析标准的技术需求。
3 结束语
综上所述，本文通过对水产品中多种喹诺酮类药物残留量进行检测方法进行研究，在上文的试验当中，通过对色谱柱的选择，确定了氧氟沙星等激发和发射波长的确定，另外使用有效的液相色谱荧光检测方法额检测，对各种不同的药物进行测定。通过试验可以得出，样品前处理方法简单，科学，同时上文提到的检测方法能够很快的检测出不同药物类别的残留量，不但节省费用，还省下了时间。
【参考文献】
[1] 魏博娟. 水产品中多种喹诺酮类药物残留量检测方法的研究[D]. 集美大学，2011,4（15）：13-22.
[2] 谭景慧. 食品中氟喹诺酮类药物残留量检测方法的研究与应用[D]. 南华大学，2013,5（1）：15-24.
[3] 高福凯. 亲和提取技术在检测水产品中抗生素残留的研究与应用[D]. 烟台大学，2013,5（1）：16-20.
【关键词】: 水产品 喹诺酮药物残留 检测方法
0 引言
喹诺酮类药物，是目前发展非常快速，进行人工合成的人畜共同使用的抗生素类药物，因为其拥有广谱，有效等其他方面的优势，不但能够对人们的不同感染症进行诊治，而且目前普遍使用在畜禽诊治，以及水产品养殖业等方面。但是这种药物，一旦进入动物体内，就可以快速的把血液扩散到组织中，使得动物组织中出现非常高浓度的药物残留。本文通过具体的分析，介绍一些喹诺酮药物残留检测方法。
1 渔用兽药残留的来源与危害
因为我国的国土面积辽阔，水产资源非常丰富，近些年来在国家政策的积极支持下，水产品养殖业得到迅猛发展，因此必须对原料来源的管理进行更深层次的强化和提升。不管是进行纯自然捕捞还是进行人工养殖，或多或少的都会遭遇到农药残留，以及其他方面的情况，具体来看，涵盖以下内容：首先，纯自然捕捞水产品，这尽管没有出现渔药投放的情况，但是环境的污染在隐形之中给水产品带来一定的程度的污染；其次在水产品养殖过程中，如果没有根据药品说明书中的规定进行严格的操作，依靠自身的经验来操作，由于渔民自身能力的不足，匮乏对水产养殖，以及药物使用方面等方面的掌握，出现乱用药， 乱投药以及其他不科学的行为，进而使得药物在水产品体内残留超出正常水平。即使渔药的使用能够在一定程度上避免水产品病害的扩延，在一定程度上防止经济损失的过大。然而这些原因的结果就是，大剂量的药物在水产品体内进行残留，如果人们进行长期的食用，在人们的体内就会急剧毒素，进而让人们的免疫系统等方面出现问题，打破了人体正常的肠道菌群环境，严重的话，还会直接威胁人们的生命安全。
2 高效液相色谱法法检测水产品中多种喹诺酮类药物残留量
2.1 高效液相色谱法的检测原理
高效液相色谱法主要用液体作为流动相，按照吸附，分配， 以及筛析不同原理进行样品分离，其固定相种类非常繁多。在高压作用下，流动相和样品在色谱柱中被频繁的进行分配，
不同的组别被隔离，最终通过检测器测出含量，具体的流程图如图1 所示。
2.2 检测试验
2.2.1 设备与试剂
其中设备主要有：高效液相色谱仪：Waters2478 高效液相色谱仪，具有双泵，美国 Waters 公司。 均质机：A-88 型组织捣碎机，北京平利洋医疗设备有限公司。 离心机：TDL80-2B 型低速台式离心机，安徽松阳医疗设备有限公司。 LD4-8 型台式离心机，郑州医用离心机厂。 TGL-16G 型高速台式离心机，长沙慈恩医疗设备有限公司。 旋转蒸发器：北京天坛科学仪器厂。循环水式多用真空泵：安徽旋洋贸易股份有限公司。振荡器：XH-C 型旋涡混合器，江西省金坛市医疗机器厂。电子天平：感量0.0001g 和 0.01g 各一台，北京安阳有限公司。 pH 计： 北京安阳有限公司。磁力加热搅拌器：上海理达仪器厂。 去离子水制取装置：Milly-Q Academic，上海百维生物科技有限公司。 固相萃取装置：美国奥泰科技有限公司。
其中试剂主要有：恩诺沙星，诺氟沙星，氟甲喹标准品：纯度大于99.0%，英国Dr.Ehrenstofer 公司；乙腈、甲醇都是色谱纯，美国 Tedia 公司；盐酸，氢氧化钠等都为分析纯，安徽安庆市溪坊化工厂。
2.2.2 溶液配制
按照具体检测的药物特点，一般情况下，标准溶液的配制方法基本如下：科学的称量诺氟沙星，氧氟沙星标准品10.0 mg，汲取0.1 mol/L HCl 溶液 10 mL，接着将乙腈放置在100 mL 容量瓶中，配成浓度为100μg/mL 的标准溶液；科学的称量恩诺沙星，环丙沙星标准品10.0 mg，用甲醇放置在100 mL 棕色容量瓶中，溶液浓度为100μg/mL ；科学的称量噁喹酸，氟甲喹标准品10.0 mg，使用0.1 mol/L NaOH 溶液10 mL 进行溶解，然后再用乙腈放置在100 mL 棕色容量瓶中，溶液浓度为 100 μg/ mL。一般将配置的溶液放置在4 ℃冰箱中进行储存，保存期不超过3 个月。
2.2.3 色谱条件
色谱柱：Zorbax Elipse XDB-C18柱，150 mm×4.6 mm（i.d.）； 流动相：A ：0.01 mol/L
四丁基溴化铵（pH 3.0）+ 乙腈=94 ＋ 6（V/V），B ：乙腈； 梯度洗脱程序具体见表1，平衡时
间5min ；流速：0.9 mL/min ；检测波长：程序具体见表2 ； 柱温：35℃ ；进样量：20 μL。
2.2.4 样品制备，提取与净化
在整个检测过程中，首先将样品进行制备：鱼类样品去除骨头和皮，选取肌肉部分；甲壳类选取能够食用的部分，将其切成小块，充分匀浆，放置在-18℃下进行冷冻储存。
其次是样品的提取和净化：称量相同样品大约5 g，将其放置在50 mL 塑料离心管，汲取20 mL 酸化乙腈，然后接着加入10 g 无水硫酸钠，使用涡旋振荡器在2500 r/min 高速振荡0.9 min-1.5 min 后，2500 r/ min 离心5min，选取上清液转移到分液漏斗，剩余的杂物使用20 mL 酸化乙腈进行再次提取2 次，合并上清液放在分液漏斗中。然后向分液漏斗中加入60 mL 正己烷溶液，同时进行充分振摇，静置分层。下层转移至梨形瓶中， 40℃水浴减压蒸发到干。把C18 固相萃取柱分别使用3 mL 甲醇，3 mL 水等预淋洗活化。使用4 mL 的磷酸盐缓冲液溶解梨形瓶中的杂物，转向提取液到柱上，过柱。流速控制在每秒一滴。重复两次，分别过柱。在过柱之后，使用3 mL 水进行冲洗； 然后再使用5 mL 洗脱液进行洗脱。搜集完洗脱液，在50℃下使用N2 进行吹干，使用1 mL 流动相定容，在经过0.22 μm 微孔滤膜后，将滤液进行检测。
2.3 结果
经过上述实验的表明，在液相色谱分析条件的确定上，样品前处理方法的确定上，以及方法回收率和精密度上，以及方法的实际应用上，都完全符合制定残留分析标准的技术需求。
3 结束语
综上所述，本文通过对水产品中多种喹诺酮类药物残留量进行检测方法进行研究，在上文的试验当中，通过对色谱柱的选择，确定了氧氟沙星等激发和发射波长的确定，另外使用有效的液相色谱荧光检测方法额检测，对各种不同的药物进行测定。通过试验可以得出，样品前处理方法简单，科学，同时上文提到的检测方法能够很快的检测出不同药物类别的残留量，不但节省费用，还省下了时间。
【参考文献】
[1] 魏博娟. 水产品中多种喹诺酮类药物残留量检测方法的研究[D]. 集美大学，2011,4（15）：13-22.
[2] 谭景慧. 食品中氟喹诺酮类药物残留量检测方法的研究与应用[D]. 南华大学，2013,5（1）：15-24.
[3] 高福凯. 亲和提取技术在检测水产品中抗生素残留的研究与应用[D]. 烟台大学，2013,5（1）：16-20.
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