红乌天麻和种麻改善东莨菪碱诱发大鼠记忆障碍的比较
【摘要】 目的 比较红乌天麻与种麻对东莨菪碱诱发大鼠记忆障碍的改善作用。方法 用红乌天麻与种麻灌胃饲养幼鼠一个月，采用一次性腹腔注射东莨菪碱诱导大鼠记忆获得性障碍模型，Morris水迷宫实验测试大鼠寻找平台的潜伏期，并测定海马组织乙酰胆碱酯酶活性及海马蛋白含量。结果 红乌天麻与种麻对东莨菪碱诱发大鼠的记忆障碍均有显著改善作用，并能抑制海马组织乙酰胆碱酯酶活性及提高蛋白含量，3 g/kg种麻剂量组的改善作用达到商品麻的水平。结论 红乌天麻和种麻对东莨菪碱诱导的大鼠记忆形成障碍有明显的改善作用，其药效达到商品麻和阳性对照水平，可以替代商品麻投料入药。
【关键词】 商品麻;种麻;东莨菪碱;Morris水迷宫;学习记忆
天麻具有平肝熄风，止痉等功效〔1，2〕。临床上常用于惊风抽搐、风湿痹、头痛、眩晕、胸痹、癫痫等疾病。近年来研究发现，天麻还具有增强免疫力、提高记忆力、抗衰老和抗遗忘的作用。天麻属于兰科非自养型植物，一直依靠采掘野生资源供药用，自然资源受到严重的破坏。60年代后，天麻的种植和栽培研究迅速发展，特别是种子繁殖成功，使天麻的生产进入了一个新的历史时期，但天麻的栽培需要消耗大量的木材，天麻种植每平方米需消耗35～40 kg木材〔3〕，天麻的大量生产与森林保护之间的矛盾日益突出。此外，天麻从种子到完全发育需要2～4年的时间〔3〕，其中由种麻发育为荨麻要1年的时间，再经历45～65 d才能长成商品麻。探究天麻种麻是否对记忆获得性障碍有改善作用，并比较天麻种麻和商品麻对记忆获得性障碍的改善作用，从而在开发益智和预防老年痴呆等相关产品方面，替代商品麻投料入药，有着极为深远的现实意义。
1 材料与方法教育教学论文发表
1.1 材料 Wistar大鼠(体重90 g)60只，雌雄各半，由湖北省实验动物研究中心提供。天麻种麻、商品麻均为红乌天麻品种，来源于宜昌市天麻研究所大老岭栽培场，海拔1 400 m。氢溴酸东莨菪碱注射液购自徐州莱恩药业有限公司，批号32022136。石杉碱甲购自豫中制药厂，批号10940156。其余试剂均为分析纯。乙酰胆碱酯酶测定和双缩脲蛋白测定盒购于南京建成生物工程研究所。Morris水迷宫购自成都泰盟科技有限公司。
1.2 方法
1.2.1 样品的制备 商品麻的制备：取红乌天研究生论文发表 麻425 g干品，水煎三次，每次40～60 min。将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩三次得到浓度为6 g/kg商品麻。天麻种麻中、高剂量制备，由三峡大学生物资源及开发研究中心提供种麻干粉,溶于水中，定容后稀释成3、6 g/kg的种麻溶液。
1.2.2 分组及给药方案 Wistar大鼠(体重90 g)，雌雄各半，随机分为6组，每组10只，分别为生理盐水对照组、模型组(灌胃生理盐水)、种麻中(3 g/kg)、高剂量组(6 g/kg)、红乌天麻组(6 g/kg)和石杉碱甲阳性对照组(2 mg/kg)〔4，5〕。以上各组浓度折合成人的剂量而得。种麻，商品麻及石杉碱甲均摇匀后按体重剂量1 ml/kg灌胃，每日1次，连续给药30 d。东莨菪碱致记忆障碍大鼠模型建立〔6，7〕：末次给药后1 h，模型组，种麻中、高剂量组，商品麻组及阳性对照组，均腹腔注射东莨菪碱(2 mg/kg)，生理盐水对照组注射等量的生理盐水。注射30 min后，在相同的条件下进行Morris水迷宫测试。
1.2.3 Morris水迷宫行为测定 定位航行试验：用于评价大鼠对水迷宫学习和记忆的能力，试验历时6 d。第一天让大鼠自由游2 min，从第二天起，每天分上、下午两次测量，每次每只大鼠训练4次，训练开始是从距离平台最远的入水点开始，将大鼠沿池壁放入水中，观察并记录其寻找至爬上平台路线图，所需时间(潜伏期)。4次训练按顺时针方向分别从4个不同入水点入水，如大鼠在120 s内未找到平台，则引领其至平台，这时潜伏期为120 s，每次训练间隔60 s，实验以潜伏期为测量指标。
1.2.4 大鼠海马乙酰胆碱酯酶活性及海马蛋白含量的测定 行为实验结束后，立即断头处死大鼠，在冰块上快速分离海马，制成10%组织匀浆，低温离心取上清液，按试剂盒说明书方法操作。
1.3 统计学处理 组间差异显著性用t检验。省级论文发表
2 结 果
2.1 各组大鼠对Morris水迷宫学习记忆的影响 各组大鼠在5 d的训练中，潜伏期处于一种下降的趋势，其中前3 d潜伏期下降较明显，是学习和记忆形成期。后2 d下降变缓和趋于平稳，是学习和记忆的巩固期，见图1。生理盐水对照组5 d平均潜伏期与模型组比较有显著差异，说明造模成功; 3 g/kg剂量的种麻组与商品麻组比较，无显著差异。商品麻组、种麻高、中剂量组的保护作用，均达到阳性对照组水平。6 g/kg剂量的种麻组的保护作用不及商品麻组(P<0.05)，见表1。
2.2 灌胃饲养一月对体重的影响 经一个月的饲养，商品麻组，种麻各组的大鼠体重均比生理盐水对照组和石杉碱甲组高，但无统计学意义，提示商品麻和种麻都有促进大鼠机体的生长发育作用，但需长期服用，效果更佳，见表1。表1 种麻对平均潜伏期和体重的影响(x±s，n=10)
2.3 商品麻、种麻对海马乙酰胆碱酯酶活性、海马蛋白含量的影响 商品麻和种麻各剂量组均能抑制乙酰胆碱酯酶活性;其中3 g/kg种麻组与6 g/kg商品麻组无显著差异;6 g/kg种麻组抑制乙酰胆碱酯酶活性不及等剂量商品麻组(P<0.05);与阳性对照组比较，商品麻组、种麻高、中剂量组均无显著差异，见表2。商品麻和种麻各组别均能提高海马蛋白含量;其中商品麻组海马蛋白含量高于种麻高、中剂量组(P<0.05，P<0.01)，见表2。表2 种麻对胆碱酯酶活性、海马蛋白含量的影响(x±s，n=10)
3 讨 论
生理性记忆可分为记忆的获得，记忆的巩固和记忆的再现三个阶段。东莨菪碱是中枢M型胆碱受体拮抗剂，可阻断M1和M2受体，降低海马乙酰胆碱含量，使动物记忆形成过程发生障碍〔8〕。大鼠腹腔注射2 mg/kg东莨菪碱可造成记忆获得性障碍模型。中枢胆碱能系统的功能是学习的重要生理基础。衰老的“胆碱能学说”认为人或动物的中枢胆碱能系统的退行性改变是造成老龄性认知、学习记忆能力衰退的主要原因〔8〕。脑内乙酰胆碱含量降低，乙酰胆碱酯酶活性升高，胆碱乙酰转移酶活性降低，M和N胆碱受体数量减少等中枢胆碱能系统的功能下降，即可在人类自然衰老过程造成学习记忆障碍〔9〕。
本研究结果提示红乌天麻的种麻和商品麻对记忆障碍模型大鼠的记忆功能有显著的改善作用，其作用机制可能与抑制乙酰胆碱酯酶活性有关。并且商品麻和天麻种麻有促进机体生长发育的功能。天麻种麻3 g/kg中剂量组在5 d平均潜伏期(s)以及抑制海马组织乙酰胆碱酯酶活性方面，达到商品麻水平;而6 g/kg剂量的种麻组与商品麻组比较，尚不及商品麻水平，推测可能与种麻制剂工艺不同有关。所以从经济发展和保护环境的绿色生产角度以及天麻种麻已能成功的代料工厂化生产，一年能培育4代，且天麻种麻的天麻素含量高于商品麻〔1〕等方面综合考查，在开发与天麻相关的益智和预防老年痴呆等产品方面，用天麻种麻替代商品麻投料是可行的，它能有效地解决天麻的产业化种植与天麻种植过程中消耗大量木材的弊端，能取得更好的经济和社会效益。
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